Principe de la PCR

La PCR , « Polymerase Chain Reaction » est une technique de réplication ciblée in vitro. Elle permet d’obtenir à partir d’un échantillon complexe (très chargé en flore) ou peu abondant, d’importantes quantités d’ADN spécifique et de longueur définie (la séquence cible).

La PCR se déroule dans un petit tube dans lequel ont été introduits tous les éléments nécessaires à la PCR  : des oligonucléotides (ou amorces), de l’enzyme (Taq polymérase), un mélange des 4 désoxyribonucléotides constitutifs de l’ADN et bien sûr l’ADN à amplifier. Ces tubes sont ensuite placés dans un thermocycleur qui place ceux-ci à différentes températures correspondant à trois étapes principales :

Les liaisons faibles, qui assuraient la cohésion entre les deux brins d’ADN, sont alors rompues : on obtient deux simples brins d’ADN (cf. schéma ci-dessous).

Les amorces hybridées à l’ADN servent de point de départ à la polymérisation du brin complémentaire de l’ADN matrice.  

La polymérisation se fait par ajout successif des désoxyribonucléotides : chaque base ajoutée est complémentaire de la base correspondante du brin matrice. Les ADN polymérases sont des enzymes qui synthétisent l’ADN de l’extrémité 5’ vers la 3’ .

De façon théorique, en partant de 2 brins d’ADN, et sachant que le nombre de cycle généralement programmé est de 45, on obtient 2⁴⁵ segments ciblés d’ADN

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Dernière modification : 11 décembre 2007